FRET ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ

ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಅನುರಣನ ಶಕ್ತಿ ವರ್ಗಾವಣೆ (FRET)

ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ಎನರ್ಜಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫರ್ (FRET) ಎಂಬುದು ವಿಕಿರಣವಲ್ಲದ ಶಕ್ತಿ ವರ್ಗಾವಣೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದ್ದು, ಇದರಲ್ಲಿ ದಾನಿ ಉತ್ತೇಜಿತ ಸ್ಥಿತಿಯ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಇಂಟರ್ಮೋಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಜೋಡಿಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೂಲಕ ಸ್ವೀಕರಿಸುವ ಉತ್ಸಾಹದ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಫೋಟಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ವಿಕಿರಣಶೀಲವಲ್ಲ.ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ವೇಗವಾದ, ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ಸರಳವಾಗಿರುವ ಅನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

FRET ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಬಣ್ಣವು ಒಂದೇ ಆಗಿರಬಹುದು.ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ವಿಭಿನ್ನ ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪ್ರಕಾಶಕ ಅನುರಣನ ಶಕ್ತಿಯ ವರ್ಗಾವಣೆಯು ದಾನಿ ಗುಂಪು ಉತ್ಸುಕರಾದಾಗ ದಾನಿಯಿಂದ (ಡೈ 1) ಸ್ವೀಕರಿಸುವವರಿಗೆ (ಡೈ 2) ಒಂದು ಜೋಡಿ ದ್ವಿಧ್ರುವಿಗಳ ವರ್ಗಾವಣೆಯಾಗಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಡೋನರ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಗುಂಪಿನ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್ ಸ್ವೀಕರಿಸುವ ಗುಂಪಿನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ವರ್ಣಪಟಲದೊಂದಿಗೆ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುತ್ತದೆ."ಎರಡು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಅಂತರವು ಸೂಕ್ತವಾದಾಗ (10 - 100 ಎ), ದಾನಿಯಿಂದ ಸ್ವೀಕರಿಸುವವರಿಗೆ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಶಕ್ತಿಯ ವರ್ಗಾವಣೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಬಹುದು."ಶಕ್ತಿಯ ವರ್ಗಾವಣೆಯ ವಿಧಾನವು ಗ್ರಾಹಕದ ರಾಸಾಯನಿಕ ರಚನೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ:

1. ಆಣ್ವಿಕ ಕಂಪನವಾಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ಶಕ್ತಿಯ ವರ್ಗಾವಣೆಯ ಪ್ರಕಾಶಕ ಬೆಳಕು ಕಣ್ಮರೆಯಾಗುತ್ತದೆ.(ಗ್ರಾಹಕವು ಬೆಳಕಿನ ಶಮನಕಾರಿಯಾಗಿದೆ)

2. ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯು ಗ್ರಾಹಕಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ತೀವ್ರವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ದ್ವಿತೀಯ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೆಂಪು ಬದಲಾವಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.(ಗ್ರಾಹಕಗಳು ಪ್ರಕಾಶಕ ಹೊರಸೂಸುವವರು).

ದಾನಿ ಗುಂಪು (EDANS) ಮತ್ತು ಸ್ವೀಕರಿಸುವ ಜೀನ್ (DABCYL) ಗಳು HIV ಪ್ರೋಟೀಸ್‌ನ ನೈಸರ್ಗಿಕ ತಲಾಧಾರಕ್ಕೆ ಏಕರೂಪವಾಗಿ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ, ಮತ್ತು ತಲಾಧಾರವು ಸಂಪರ್ಕ ಕಡಿತಗೊಳ್ಳದಿದ್ದಾಗ, DABCYL EDANS ಅನ್ನು ತಗ್ಗಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಫ್ಲೋರಿನ್‌ಗೆ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.HIV-1 ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಸಂಪರ್ಕ ಕಡಿತಗೊಂಡ ನಂತರ, EDANS ಇನ್ನು ಮುಂದೆ DABCYL ನಿಂದ ತಣಿಸಲ್ಪಡುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು EDANS ಲೂಸಿಫೆರೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ತರುವಾಯ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು.EDANS ನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಯ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳ ಲಭ್ಯತೆಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಬಹುದು.

FRET ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಪೆಪ್ಟಿಡೇಸ್ ಅನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಅನುಕೂಲಕರ ಸಾಧನಗಳಾಗಿವೆ.ಅದರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ್ದರಿಂದ, ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಇದು ಅನುಕೂಲಕರ ವಿಧಾನವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ದಾನಿ/ಸ್ವೀಕರಿಸುವವರಿಂದ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಬಂಧಗಳ ಜಲವಿಚ್ಛೇದನೆಯ ನಂತರ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಶೀನ್ ನ್ಯಾನೊಮೊಲಾರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಅಳತೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.FRET ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅಖಂಡವಾಗಿದ್ದಾಗ, ಅದು ಆಂತರಿಕ ಫ್ಲ್ಯಾಷ್‌ನ ಹಠಾತ್ ಕಣ್ಮರೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ದಾನಿ/ಸ್ವೀಕರಿಸುವವರ ಎದುರಿನ ಯಾವುದೇ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಬಂಧವು ಮುರಿದಾಗ, ಅದು ಫ್ಲ್ಯಾಷ್ ಅನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಅದನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದು ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಂತರ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬಹುದು.